Restriktionsstelle

Die Restriktionsstelle (synonym Restriktionssequenz) ist eine DNA-Sequenz, an der ein bestimmtes Restriktionsenzym bindet und die DNA schneidet.

Eigenschaften

Jedes Restriktionsenzym besitzt eine charakteristische DNA-Sequenz (Erkennungssequenz) von meistens drei bis acht Basenpaaren,[1] an die es binden kann. Die zwei verschiedenen Restriktionsstellen und die an dieser Stelle schneidenden Restriktionsenzyme werden im Zuge einer Klonierung so ausgewählt, dass nach dem Restriktionsverdau der DNA eine Ligation mit dem Vektor in korrekter Orientierung erfolgen kann. Da Restriktionsenzyme meistens als Homodimere an die Erkennungssequenz binden, sind die Erkennungssequenzen palindromisch.[2] Isoschizomere erzeugen den gleichen DNA-Schnitt, während Neoschizomere nur die gleiche Erkennungssequenz besitzen.

Manche Restriktionsstellen erzeugen blunt ends (Schnittstellen ohne Basenüberhang), andere sticky ends (Schnittstellen mit Basenüberhang). Ein Basenüberhang erlaubt die Bindung einer anderen DNA mit komplementärem Basenüberhang durch Basenpaarung, wodurch die Ligation durch eine DNA-Ligase viel effizienter verläuft.[3][4]

REBASE ist eine Online-Datenbank, die Restriktionsstellen aufführt.[5][6]

Literatur

  • Cornel Mülhardt: Der Experimentator: Molekularbiologie/Genomics. Sechste Auflage. Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg 2008, ISBN 3-8274-2036-9.
  • J. Sambrook, T. Maniatis, D. W. Russel: Molecular cloning: a laboratory manual. 3rd edition (2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press. ISBN 0-87969-577-3.

Einzelnachweise

  1. ↑ Peter J. Russell: iGenetics: A Mendelian Approach. Benjamin Cummings, 2006, ISBN 978-0805346664.
  2. ↑ Albert L. Lehninger, David L. Nelson, Michael M. Cox: Principles of Biochemistry, 5th. Auflage, W.H. Freeman and Company, New York, NY 2008, ISBN 978-0-7167-7108-1. S. 305.
  3. ↑ Mohammad Mousavi-Khattat, Adele Rafati, Pooria Gill: Fabrication of DNA nanotubes using origami-based nanostructures with sticky ends. In: Journal of Nanostructure in Chemistry. 5, 2015, S. 177, doi:10.1007/s40097-015-0148-z.
  4. ↑ S. Gao, J. Zhang, T. Miao, D. Ma, Y. Su, Y. An, Q. Zhang: A simple and convenient sticky/blunt-end ligation method for fusion gene construction. In: Biochemical genetics. Band 53, Nummer 1–3, April 2015, S. 42–48, doi:10.1007/s10528-015-9669-x, PMID 25820211.
  5. ↑ R. J. Roberts, T. Vincze, J. Posfai, D. Macelis: REBASE–a database for DNA restriction and modification: enzymes, genes and genomes. In: Nucleic acids research. Band 38, Database issueJanuar 2010, S. D234–D236, doi:10.1093/nar/gkp874, PMID 19846593, PMC 2808884 (freier Volltext).
  6. ↑ R. J. Roberts, T. Vincze, J. Posfai, D. Macelis: REBASE–a database for DNA restriction and modification: enzymes, genes and genomes. In: Nucleic acids research. Band 43, Database issueJanuar 2015, S. D298–D299, doi:10.1093/nar/gku1046, PMID 25378308, PMC 4383893 (freier Volltext).